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及時干預一級胎牛血清問題是保障細胞健康與實驗可重復性的關鍵
點擊次數(shù)：236 更新時間：2025-11-24
一級胎牛血清雖品質優(yōu)良，但在實際使用中仍常因儲存不當、解凍錯誤或批次差異引發(fā)細胞生長緩慢、形態(tài)異常、污染風險升高甚至實驗失敗?？茖W識別并及時干預一級胎牛血清出現(xiàn)的問題，是保障細胞健康與實驗可重復性的關鍵。
問題一：細胞貼壁差、增殖緩慢
原因：血清批次間差異、熱滅活過度、或血清失效。
對策：
新到血清先進行小規(guī)模預實驗，對比舊批次細胞生長曲線；
除非實驗明確要求（如補體敏感細胞），避免常規(guī)熱滅活（56℃,30min），因其會破壞部分生長因子；
若必須熱滅活，嚴格控溫并輕柔搖勻，防止蛋白變性沉淀。
問題二：培養(yǎng)基出現(xiàn)大量絮狀沉淀
原因：反復凍融、高溫解凍或脂蛋白析出。
對策：
正確解凍：–20℃→4℃冰箱過夜→室溫緩慢融化，全程避免37℃水浴快速解凍；
解凍后輕柔顛倒混勻，切勿劇烈搖晃；
沉淀若為脂蛋白（非微生物污染），可400×g離心5分鐘取上清使用，不影響細胞生長。
問題三：細胞狀態(tài)突然惡化或死亡
原因：血清被支原體/病毒污染、內(nèi)毒素超標或運輸中溫度失控。
對策：
購買時選擇提供完整質檢報告（含BVDV、IBRV、支原體、內(nèi)毒素<10EU/mL）的供應商；
收貨后立即檢查冷鏈記錄，–20℃以下保存；
懷疑污染時，更換新批次血清+新配培養(yǎng)基，并對細胞進行支原體檢測。
問題四：實驗重復性差
原因：不同批次血清成分波動影響信號通路。
對策：
一次性采購足量同一批號血清，分裝保存（每管100–200mL），避免頻繁開蓋；
建立“主細胞庫+工作細胞庫”體系，減少對血清波動的依賴；
長期項目可逐步過渡至化學成分確定的無血清培養(yǎng)基（需工藝驗證）。
